干貨分享 | 搭建蛋白純化工藝時需考慮的因素

    一般來說，蛋白純化工藝由層析工藝搭配膜工藝來完成，一個好的純化工藝需要各個工序完美配合和銜接，最終獲得符合要求的目標產(chǎn)物。在制定純化工藝時，層析工藝和膜工藝作為兩大步驟都很重要，通過相互配合共同形成完美工藝。

   在制定純化工藝時需要對純化目標產(chǎn)物有充分的了解，根據(jù)目標產(chǎn)物的性質(zhì)特點選擇合適的純化策略。常規(guī)的膜工藝一般分為深層過濾、除菌過濾、除病毒過濾和切向流過濾等；常規(guī)的層析工藝一般分為親和層析、陰離子層析、陽離子層析、疏水層析和復(fù)合模式層析等；層析工藝又分為兩種模式：結(jié)合洗脫模式和流穿模式。在純化工藝設(shè)計中，膜工藝與純化工藝如何搭配？層析工藝模式如何選擇？不同的設(shè)計思路可能都會獲得一條符合要求的工藝路線，但時間、人力及便捷性可能大不相同。

膜工藝中較為關(guān)鍵的參數(shù)為壓力、流速和載量，可根據(jù)實際需求進行相關(guān)工藝參數(shù)的優(yōu)化，獲得較好過濾性能。

表1  膜工藝的選擇

表2  層析中結(jié)合洗脫模式和流穿模式的選擇

    （根據(jù)常規(guī)純化思路推薦）

   純化中一般根據(jù)目標產(chǎn)物的特性進行選擇合適層析工藝和模式，通過工藝參數(shù)優(yōu)化可顯著提高每個層析工藝純化性能；最后通過合適組合形成整套合適工藝。

下文以純化帶有Fc結(jié)構(gòu)，分子量100kD，等電點8.0的蛋白產(chǎn)物為例，通過組合深層過濾、除菌過濾、切向流濃縮、親和層析、陰離子層析、陽離子層析、疏水層析和凝膠過濾層析具體分析工藝搭配的注意事項。為了方便探討每步驟的作用盡可能多的增加工藝步驟，實際操作可能僅采用部分工藝即可滿足純化需求。

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